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1990~1998意大利南部的肠炎沙门氏菌对抗生素的抗性

Antonino Nastasi, *Caterina Mammina, +Lucia Cannova+  

Chinese Translations - 中文译本 > Volume 6 - 第6卷

Article in English

*意大利佛罗伦斯,佛罗伦斯大学, 意大利巴勒莫,巴勒莫大学

1990年至1998年期间,我们鉴定了从意大利南部分离的具有多重抗药性的肠炎沙门氏菌。检测到了含Ⅰ族整合子并能编码合成extended-spectrum β-lactamases的质粒。因此,有必要对其抗生素耐性进行适时监测,以减少抗性克隆传播的可能性。

在过去的十年中,肠炎沙门氏菌感染的发生率在许多国家中都有所增加。现在在欧洲,这种血清型已在所有从人类中分离所得的沙门氏菌属中占主导地位(1)。在意大利南部地区,从1990年至今,肠炎沙门氏菌的鉴定报道持续增多,这也与整个欧洲的增加趋势一致。1995年和1996年,肠炎沙门氏菌的分离率有所下降,但此后,来自个别病例以及食物传染引起的爆发流行的肠炎沙门氏菌的分离率都有所增加。根据意大利南部的肠致病菌中心的记录表明,1998年期间,在所有人类沙门氏菌分离株中,肠炎沙门氏菌所占比例大约为45%,并且其中61%是从因肠炎而住院治疗的病人中分离而来。在这种肠炎血清型中,很少能耐抗菌药物,但是在一些地中海国家,肠炎沙门氏菌的耐抗菌药物性正在逐渐增加(2)。

我们对1990年至1998年从意大利南部的人群、动物和环境中分离鉴定到的肠炎沙门氏菌的耐药谱进行了一次回顾性调查,并从分子水平对耐药机理进行了研究。

调查:

1990年至1998年,意大利南部巴勒莫的肠致病菌中心共收集了1889株肠炎沙门氏菌:其中86%来自于人类,2.9%来自于感染动物(多为家禽),6.7%来自于污染植物流出物和地表水,4.4%来自于食物(多为鸡蛋和鸡蛋有关的菜肴),所有菌株都用标准试验进行了生化鉴定对菌体和鞭毛抗原进行了血清学分型。并用10种标准噬菌体进行了噬菌体分型(3)。

1889株菌中有44株(2.2%)具有至少一种抗生素耐性;我们对这44株菌的抗生素抗性类型、噬菌体型和质粒谱进行了比较(表)。在研究的沙门氏菌中,只耐氨苄青霉素或同时耐其它β-内酰胺类药物以及只耐四环素或同时耐aminoglycosides、磺胺类药和甲氧苄啶类药物是最常见的表现型。在17株耐四环素菌株中,分别有98株有8030Mdal的传导性质粒。用Kirby-Bauer的方法(7),我们发现有6株从儿科肠炎病人分离的菌(3株分别在199219941996年从西西里岛分离;3株在1997年从卡拉布里亚分离)具有氨苄青霉素、氨曲南、头孢噻酚、第三代头孢菌素和磺胺类药耐性。1997年分离得到的三株中还有两株具有       氯霉素抗性。6株菌的double-disk synergy试验均为阳性,表明产生了ESBL。已发现有5株的广泛耐药谱的形成是由于387080Mda质粒的结合性传导所致。从1992年鉴定的一株菌中检测出了一种30MDal的质粒,但这种质粒携带的耐药性不能传递给受体细胞。

6株肠炎沙门氏菌分别带有含0.82.5KbDNA的插入域的整合子   (),这些整合子能从这几株菌中结合转导至大肠杆菌,表明它们是由质粒携带的。从ESBL产生株中可获得大约2.0KbDNA片段。

表:肠炎沙门氏菌株的抗性类型,意大利南部,1990-1998

来源

地区

噬菌体型

抗性类型a

质粒类型(分子量Mda)

大肠杆菌受体菌的抗性类型

整合子(插入域大小,Kb)

1990

西西里岛

RDNC

Ap

36,25

1991

蛋糕b

西西里岛

4

Su,Tp,Tc

80,c36

Tp,Tc

2.5

1992

海洋食品

亚普利亚

4

Ap

30

Ap

1992

海洋食品

亚普利亚

4

Ap

36,30

Ap

1992

西西里岛

4

Ap,Kf,Atm,Caz,Cro,Ctx,Su

30

1992

西西里岛

RDNC

Ap,Kf,Sm,Su,Tc

30

Ap,Sm,Su,Tc

1992

卡拉布里亚

4

Gm,Sm,Su

80,70

0.8

1992

西西里岛

RDNC

Sm,Su,Tp

80,36

Sm,Su,Tp

1992

卡拉布里亚

1

Su,Tp,Tc

80,36

Tp,Tc

1.5

1993

卡拉布里亚

7

Gm,Sm,Tc

80

Tc

1993

西西里岛

4

Sm,Tc

80,36

Tc

1993

西西里岛

4

Sm,Su,Tp,Tc

80,36

Sm,Su,Tp,Tc

1993

西西里岛

7

Sm,Su,Tp,Tc

80,36

Sm,Su,Tp,Tc

1994

西西里岛

4

Ap,Kf,Atm,Caz,Cro,Ctx,Su

80,36

Ap,Kf,Atm,Caz,Cro,Ctx

2.0

1994

西西里岛

RDNC

Tc

36,30

Tc

1994

西西里岛

4

Tc

36,30

Tc

1995

卡拉布里亚

4

Tc

36,30

Tc

1995

亚普利亚

4

Tc

80,36

Tc

1995

亚普利亚

7

Tc

36,30

Tc

1996

西西里岛

4

Ap,Kf,Atm,Caz,Cro,Ctx,Su

80,36

Ap,Kf,Atm,Caz,Cro,Ctx

1996

b

西西里岛

RDNC

Tc

36,30

Tc

2.0

1996

亚普利亚

RDNC

Tc

30

Tc

1997

西西里岛

4

Ap

36,30

1997

西西里岛

4

Ap

36

1997

西西里岛

1

Ap

36,30

1997

卡拉

布里亚

4

Ap,Kf,Atm,Caz,Cro,Ctx,Cm,Su

70,36

Ap,Kf,Atm,Caz,Cro,Ctx,Cm

1997

卡拉布里亚

4

Ap,Kf,Atm,Caz,Cro,Ctx,Cm,Su

38,36

Ap,Kf,Atm,Caz,Cro,Ctx,Cm

1997

卡拉布里亚

RDNC

Ap,Kf,Atm,Caz,Cro,Ctx,Cm,Su

80,36

Ap,Kf,Atm,Caz,Cro,Ctx

2.0

1997

亚普利亚

1

Ap,Sm,Tc

36,30

Ap,Sm,Tc

1997

卡拉布里亚

1

Ap,Sm,Tc

36,32

Ap,Sm,Tc

1997

西西里岛

4

Cm,Su,Tp

36,32

Cm,Su,Tp

1997

西西里岛

4

Su,Tp

36

1997

家禽

西西里岛

14b

Tc

80,36

Tc

1997

西西里岛

14b

Tc

80

Tc

1997

西西里岛

NT

Tc

80

Tc

1997

西西里岛

13

Tc

80,36

Tc

1997

西西里岛

RDNC

Tc,Nal

80,36

Tc

1998

西西里岛

4

Ap

70,36

Ap

1998

污水

西西里岛

RDNC

Ap,Kf

36

1998

西西里岛

RDNC

Tc

36,30

Tc

1998

西西里岛

7

Tc

30

Tc

1998

西西里岛

6a

Tc

80,36

Tc

1998

西西里岛

RDNC

Tc

36,30

Tc

1998

家禽

西西里岛

RDNC

Tc

30

Tc

Ap,氨苄青霉素;Kf,头孢噻酚;Atm,氨曲南;Caz,头孢他定;Cro,头孢曲松;Ctx,头孢氨噻;Cm,氯霉素;Gm,庆大霉素;Sm,链霉素;Su,磺胺类药;Tp,甲氧苄啶;Tc,四环素;Nal,萘啶酸;RDNC,未试验;NT,未分型

a用氨苄青霉素(10цɡ),头孢噻酚(30цɡ),头孢氨噻(30цɡ),氯霉素(30цɡ),环丙沙星(5цɡ),庆大霉素(10цɡ),萘啶酸(30цɡ),链霉素(10цɡ),磺氨类药

300цɡ),四环素(30цɡ)和甲氧苄啶(5цɡ)来筛选菌株抗性。具有头孢氨噻抗性的菌株进一步试验其对氨曲南(30μɡ),头孢他定(30μɡ)以及头孢曲松(30μɡ)的敏感性。抗性的决定采用抑菌圈法(4)。对可能产生extended-spectrum β-lactamase(ESBL)的菌株进行double-disk synergy test。质粒提取采用碱裂解法(5)。质粒DNA样品进行0.7%琼脂糖凝胶电泳。通过与提取自大肠杆菌的已知分子大小的质粒相比较来估计质粒的近似分子量。转化实验在LB肉汤中进行。大肠杆菌转化克隆的筛选采用含利福平(300μɡ/ml)和氨苄青霉素(50μɡ/ml)链霉素(30μɡ/ml)氯霉素(30μɡ/ml)或四环素(30μɡ/ml)的麦康凯琼脂。所有的抗性分离菌都用与特异位点重组插入序列相邻序列的5ˊ-CS3ˊ-CS域特异互补的单核苷酸引物来筛选有无族整合子(6)。引物序列为5ˊ-CSGGCATCCAAGCAGCAAG3ˊ-CSAAGCAGACTTGACCTGA5)。

b来源于爆发流行

c粗体字表示抗性质粒的近似分子量大小

结论

在这次9年的调查中发现肠炎沙门氏菌中耐药株所占比例很小,2.3%具有至少一种抗生素耐性,0.9%3种或以上抗生素耐性。意大利南部的肠炎沙门氏菌耐药株流行情况与其它欧洲国家如英国和威尔斯(8)以及捷克斯洛伐克共和国(9)相似;其流行率低于希腊1987年至1993年的调查结果,后者从人类和非人类来源的肠炎沙门氏菌中有抗生素耐性的菌株高达67.4%,并且耐药株所占比例持续增加直到1991年(2)。由于耐药株很少且通常来自于人,因此并未对意大利南部分离鉴定的肠炎沙门氏菌的普遍的或可能与来源相关的耐药类型流行趋势进行研究。

一些肠炎沙门氏分离菌的不寻常的抗生素抗性使这样一个问题变得非常重要:一个普通血清型的沙门氏菌获得耐药性后被传播给大众食物常可引起食物源性爆发流行。我们从与流行病学无关的例子中鉴定了6ESBL产生株,这是一个很宝贵的发现(10-12)。所有6株菌都是从社区获得性肠炎病例的健康儿童且近期无住院史或抗生素治疗史的儿童中分离得到。这个调查结果并非与多重耐药性克隆的筛选或抗性决定簇的获得是抗生素治疗的结果的假设相一致。应特别注意的是,早在1991年的分离菌株中即出现了整合子,因为,这些整合子能通过胞内和胞间特殊基因传播抗性(1314)。

虽然多数意大利南部分离鉴定的菌株是易感的,但我们仍应重视其流行病学的某些方面。由于抗性克隆的潜在性传播所具有的公共卫生意义,因此,对肠炎沙门氏菌抗生素耐性的适时监测是非常重要的。

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