1999年俄罗斯南部暴发流行期间分离出的两株西尼罗河脑炎病毒

D. K. Lvov.  A. M. Butenko 等 

Chinese Translations - 中文译本 > Volume 6 - 第6卷

Article in English

摘要：1999年7-9月，在俄罗斯南部由西尼罗河脑炎病毒（黄热病病毒）引起的脑膜炎广泛流行，造成数百人发病和许多人死亡，用从病人的血清和脑组织标本中分离出的两株病毒与其它西尼罗河脑炎病毒株感染的恢复期病人血清和免疫性腹水进行血凝一抑制试验和中和反应试验。

1999年7-9月在俄罗斯南部（伏尔加格勒, 阿斯特拉罕, and Krasnodar地区）广泛流行脑膜炎，近1000人发病至少40人死亡。在俄罗斯南部已有节肢动物病毒感染的自然疫源地的报道（1-5）。临床和流行病学的研究提示这次暴发与西尼罗河脑炎病毒有关，从病人标本的初步血清学试验证实了病毒的存在，我们进一步报导从该次暴发流行或病人分离病毒株的病原学试验。

研究：为了分离病毒，我们对发烧4—6天的25个病人的血清标本以及18个取自5个病人尸检的脑脊液和脑组织标本进行试验，已公布的NS5和E基因为基础的引物，通过逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）对组织和脑脊液进行分析，证实了西尼罗河病毒基因的存在（7、8）。病毒分离是从被感染的3-4天龄的乳鼠分离病毒。鼠额内注射0.01ml的病人组织液，在接种6-7天后肓目转代，将以前已注射而无症状鼠的脑组织悬液接种于新鼠颅内中，当小鼠开始出现疾病症状时，用血凝反应（HT）和血凝抑制反应（HIT）来测定脑组织的西尼罗河脑炎病毒。用0.5mol/L  NaCL配制10%悬液，并用硼酸盐缓冲液稀释5倍，抑制非特异性的抑制物，然后用pH6—4的鹅红细胞滴定该悬液（9）。通过ELISA直接夹心法作感染鼠脑悬液的病毒抗原性鉴定（9）。

通过HIT中和反应和ELISA试验用本次流行中流行期间恢复期病人血清和小鼠的免疫性腹水鉴定病毒株，将免疫性腹水（LAF）加10倍系列稀释后，用微量方法在猪的肾细胞上进行中和试验（NT），用Reed和Mench计算中和指数，评估其结果（表1）。

表1  用免疫性腹水进行中和试验的LEIV27889vlg毒株的中和指数

我们检测了伏尔加格勒地区患脑膜炎病死的5个病人（63、67、71、72和16岁）的脑组织，用RT-PCR方法检测所有5个标本均检出黄热病病毒和西尼罗河脑炎病毒的RNA，但仅在16岁病人标本中分离出病毒，用此病人的脑组织注射的乳鼠4-6天发病，第二代培养时间减少到3-5天，以后传代减少到3天，在第二代，我们在鼠脑病毒悬液中检测到滴度为1：128的血凝素。在HIT中用对西尼罗河脑炎病毒的IAF可抑制这株病毒，用ELISA法测定小鼠脑组织悬液该病毒抗原滴度在1：80—1：60之间，将这株病毒编号为LEIV22889VIg，病人脑脊液的18个标本在RT-PCR实验中检测全是阴性，未检出病毒核酸及在乳鼠中未分离出病毒。

将阿斯特拉罕地区25个病人血清标本作分离病毒试验，有一个病人血清在接种乳鼠7-8天后，分离出AST986病毒株，在传代第三代后培养时间减少到3天，用西尼罗河脑炎病毒的IAF第二代小鼠脑组织悬液的滴度为1：640作HIT血凝素抗原被确定（表2）。

 表2  通过用IAF和黄热病病毒抗原性HIT试验鉴定

LEIV27889VIg和Ast986毒株

nt=未作试验；LAF=免疫性腹水

通过HIA的LEIV27889VIg和Ast986两病毒株的HIT试验（表2）在西尼罗河脑炎病毒中的LEIV27889VIg和LEIVAz-1640病毒株的抗原与类似滴度中所有已研究黄热病病毒的IAF反应（除黄热病外）。当用LEIV27889VIg病毒株做NT试验时（表1），用IAF可中和所有的西尼罗河脑炎病毒和Kokobera病毒株（中和指数6.0~8.5）。用病人恢复期血清HIT试验进一步证实了鉴定的病毒株LEIV27889VIg和Ast986。

讨论：根据生态病毒学中心，D. I.  Ivantvsky病 毒学研究所和协作实验室的病毒学和血清学资料，西尼罗河脑炎病毒流行区在前苏联包括（拉脱维亚、乌克兰、白俄罗斯，俄罗斯欧州南部地区（沙漠地区、西伯利 亚无树木大平原以及暂时森林）和西伯利亚阿尔泰地区西部（无树木大平原和森林平原连接地区）以及亚美尼亚、阿塞拜疆、哈萨克、塔吉克、乌兹别克和土库曼地 区，最近20年在哈萨克和中亚的国家，阿斯特拉罕地区（在俄罗斯），乌克兰和阿塞拜疆观察到此病（1）。接触西尼罗河脑炎病毒的高危区在伏尔加河盆地的沙漠地带，1999年特别是在这些河谷区域暴发流行。

在伏尔加河三角洲地区鸟类集中的地方，嗜（亲）鸟蚊虫的种属（Culex modestus）对西尼罗河脑炎病毒的传播起着主要作用。Culexp. pipiens和C. p. mdestus两种鸟野生和家养的都被这种蚊虫叮咬，人类也能被这种蚊虫叮咬，在伏尔加河的三角洲有56种鸟涉及这种病毒的传播，最主要的宿主是三角洲岸边的鸟类，特别是Gressores order，绿色苍鹭（Nicticorax nicticorax, 45%有抗体），大鸬鸶（Phalacroeorax carbo），大鷭    （  Fulica atua）, 鷭         ( Gallinula chloropus)，鸶和大鸊（Podiceps cristatus），以及小范围鸥和燕鸥（10），在伏尔加河农业区有20种鸟（特别是白嘴鸦、乌鸦和鸽子）都涉及病毒的传播（11），在三角洲其它地区以及阿斯特拉罕半沙漠区和Kalmykia此病毒少见。在库班河和Terek河三角洲，最主要的鸟是苍鹭、大鷭   和某些种属鸭子。

根据这些资料，西尼罗河脑炎病毒的发生并不奇怪，然而这种高死亡率和广泛感染是异常的，产生的原因可能是高温、蚊子广泛滋生，人口密集，以及病毒基因型改变。在俄罗斯南部的西尼罗河脑炎病毒生态学与罗马尼亚东北部和多瑙河三角洲（12、13）相类似。1999年在纽约西尼罗河脑炎病毒流行时，观察到不同生态学情况，（8,14-17）。由飞机或船携带的在非洲、亚洲、欧洲流行区感染的蚊子把病毒传入美国大陆。都市亚种C. P. Molestus其不吸血就能繁殖，该种属可能已输入此病毒；这些亲鸟蚊虫叮咬了被感的鸟类后被感染，这种蚊子对一种极其类似西尼罗河脑炎病毒的Karshi病毒高度敏感性，为实验所证实（18）。最近在流行中分离出的病毒株和前苏联的其它西尼罗河脑炎病毒基因排列顺序结果今后将报导

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