包氏螺旋体和德地鹿蜱中人粒细胞埃里希体病病原体

Kathleen L. Curran, Jonathan B. Kidd, Jaime Vassallo, Victoria L. Van Meter
Wesley College, Dover, Delaware, USA

Chinese Translations - 中文译本 > Volume 6 - 第6卷

Article in English

在德来威尔1998年的涉猎季节，从252头自尾鹿中收集了1480只蜱；98％是肩突硬蜱，自1988年报道为85％以来有了较大的增长。蜱被检测了包氏螺旋体和人粒细胞埃里希体病病原体。新喀斯特和肯特农村的感染率保持稳定，但在苏来克斯农村却从小于栅增加到8％。

德来威尔是美国莱姆病发生率最高的地区之一，平均的年度发生率超过了过去十年的

14．43例／100000（1）。肩突硬蜱，包氏螺旋体生存的必要条件，莱姆病的病原体，也被暗示在传递HE的病原体中起作用（2），从1986年到1997年在美国有449例HE病人被报道（3）， 他们中没有一人在德地，在那里，莱姆病是不报道的。     为了了解德地的肩突硬蜱和包氏螺旋体的感染率是否有增长以及HE病原体是否呈现， 我们用PCR法检测了蜱的包氏螺旋体和HE病原体（4，5）。仅有的可利用的关于包氏螺旋 体感染率和德地的蜱密度资料是从1988年的一项研究寄生于澳地猎人天堂的白尾鹿中获得 的（6）。

方法

在1998年的涉猎季节，猎人把鹿带到位于德来威尔自然资源行政区的三个农村的六个检查站。鹿被检查了1998年11月13一21日间的蜱。每头鹿被收集了包括出生的地点。性别、大约的年龄以及体重等信息。在1988年的研究中，每头鹿的一边的头、脖于及肩膀被搜寻了蜱婢。所有的蜱被放置于70％的乙醇里保存着用于鉴定。每个农村以及周边地区收集的婢中肩突硬蜱婢的百分比被同1988年的研究中报道的百分比进行了比较（用之检验比较）。

因为血红素影响PCR的精确度（8），所以吸足血的蜱婢被排除了。50只肩突硬蜱随机的从德地的三个农村之一的未吸足血的雄性和雌性蜱中选择。细菌的DM用Persing等描述的修复DNA的方法进行修补（9）。间言之，蜱同20ul灭菌的0．5mm的玻珠一起放于灭菌的微离心管里，用1％的牛血清自蛋白处理。加入0.1Mtris缓冲液（25u1,PH8.3，蜱被同玻珠一起处理一分钟以释放出其中的内容物。样本煮沸5分钟后，立即放入冰水中2分钟，然后置于4℃直到进行PCR。

至于包氏螺旋体，寡核苷酸引物0Sp一A1和0Sp一A2（5）从仅有的DM（Midland，TX）中获得。用0.5ul的每种引物,5ul的蜱抽取物以及25ulREDTAQPCR的混合物在Htc中进行PCR.各样本在95℃变性处理2分钟，变性旋转40转（94℃30min），退火（54℃30min）扩增（72℃2min）。样本在0.8％的琼脂中作电泳分析，用EB染色，然后在紫外透射灯下观察。如果预期的158一bp片段被发现则样本被认为是阳性的。

对于HE病原体，我们用Massung等描述的巢式PCR（10）．ge3a和ge10r引物从仅有的DNA中获得。在Htc中，0.5ul的每种引物，5ul的蜱抽取物以及25ulREDTAQ PCR的混合物进行第一轮PCR。各样本在95℃变性处理2分钟，变性旋转40转（94℃30min），退火（55℃30min）扩增（72oC2min）。样本在0．  8％的琼脂中作电泳分析，用EB染色，然后在紫外透射灯下观察。如果预期的932bn片段被发现则样本被认为是阳性的。

阳性的蜱用从仅有的DNA中获得的ge9f和ge2（10）引物同5ul的起始的阳性PCR溶液一起作第二轮PCR分析。扩增与分析的条件同第一轮相同，除了使用30转以外。如果预期

的546bn产物在第二轮PCR被发现则样本被认为是阳性的。质量控制的方法包括在那鲁大学中保存的感染的肩突硬蜱蛹以及从田野中收集的成年鹿蜱婢的阳性质控。阴性样本则是用稀释液代替蜱抽取物。

在1998年11月1321日间,252只鹿被检查,1480只蜱被收集（见表）。在新喀斯特农村收集的肩突硬蜱的百分比从1988年（99们到1998年（98％）保持稳定（图1），在肯特。苏来克斯以及周边农村，肩突硬蜱的百分比有较大增长，从1988年的93％增加到1998年的100％（Z=5.0，a=0.05）．在苏来克斯农村，1988年收集的蜱中，6肌为肩突硬蜱，在1998年这个比例为96％（Z＝17．0，a=0.05）．在周边农村，肩突硬蜱的比例也有较大增加，从1988年的85％增加到1998年的98％（Z＝13．3，a=0.05）。

在新喀斯特农村检测的50只蜱中，6只为包氏螺旋体阳性，2只为HE病原体阳性。在肯特和苏塞克斯农村，50只中有4只为包氏螺旋体阳性，没有HE病原体阳性。没有两种均为阳性的。

结论

本项研究证实了新喀斯特和德来威尔农村的HE病原体的出现。虽然在蜱中的感染率较低（仅为4％），但内科医生应该关注该病的危险性。在Alabama，那里报道过在肩突硬蜱中的包氏螺旋体的感染率为3％（11），54例莱姆病在1996年被报道（12）。大部分被证实的HE病例发生在德来威尔这样的有较高的莱姆病发生率的州（13）。虽然德来威尔没有一只

HGE阳性蜱为包氏螺旋体阳性。但这样的同时感染在其他地方的蜱婢中是被报道过（3，14，15），人也一样（16）。

在德地，莱姆病在1998年更加频繁的被报道（1）。最大的包氏螺旋体的感染率增长同

最高的肩突硬蜱的增加是一致的。在苏来克斯的鹿中发现的蜱中的肩突硬蜱的百分比有最大的增长。在1988年，62％的寄生于鹿的蜱为肩突硬蜱；这个比例在1998年增加到了96（图

1）。苏来克斯农村也有包氏螺旋体的最大增长（图2）a我们的数据显示，最高的莱姆病发

生率应该是位于包氏螺旋体在肩突硬蜱中感染率增加的地区。先前的研究说明了莱姆病例数同肩突硬蜱数间的相关性（17，18）。

为了同时检测包氏螺旋体和HE病原体，我们用了PCR，在1988年用了免疫荧光分析（2）。对比不同方法所得到的感染率是较困难的；例如，预计的在苏来克斯农村的包氏螺旋体的感

染率用PCR能得到较敏感的结果（15），但是，我们仅仅在苏来克斯看到了感染率较大的增

长，那里肩突硬蜱的比例有相应的增长。我们的结果表明，至少在苏来克斯农村，肩突硬蜱是非常普遍的，包氏螺旋体感染率较高，因此现在莱姆病的感染率高于10年前。为了能对

比不同研究中的感染率，我们检查了寄生于鹿的蜱，以求被调查的蜱能更好的估计人的危险性。

莱姆病的分布和HGE在德来威尔仍十分有限。从涉猎地获得的蜱婢提供的仅仅能较粗略的显示在那力有蜱和细菌存在。鹿能在较大的范围内活动，猎人可能没有选好涉猎地，在相同的地区感染率会发生变化（15）。因此，仅仅依靠从鹿中收集的蜱是不能提供足够的关于某些特殊地区的暴露于莱姆病或HGE所致的可能的危险性信息。  

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